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植物基因组DNA提取.

植物基因组DNA提取常见问题

Wolact品牌植物基因组DNA提取产品对各类难处理的植物有着良好的适用性。

1. 植物样本液氮研磨充分的标准是什么?

答:液氮中研磨尽量越细越好。

2. 为什么所得基因组低产量或无DNA?

通常有多种因素会影响基因组DNA产量,包括样本来源、样本新老程度、样本保存条件、操作等。

(1)提取过程中无法获得基因组DNA
可能存在的原因如下:

a. 组织样本保存不当或保存时间太长,导致基因组DNA已经降解。
建议:组织样本保存于液氮或者-70℃;尽量使用新近采集样本进行基因组DNA的提取。

b. 样本用量过少可能导致提取不到相应的基因组DNA。
建议:对于保存时间很长或基因组DNA降解比较严重的组织样本,可以适当增加组织样本的用量,以便提取获得满意的基因组DNA。可以根据DNA的需要来确定样本的用量,但是新鲜样本不宜超过200mg,干燥样本不宜超过50mg,

c. 样本没有进行液氮研磨或液氮之后放置时间过长。
建议:在进行DNA提取时,样本需进行夜氮充分研磨以破碎细胞壁;研磨完成后请尽将样本加入Buffer PL中(一旦研磨的粉末融化,基因组DNA便开始降解)。

d. 试剂盒保存不当或存放时间太长了导致试剂盒里面某些组分失效
建议:购置新的植物基因组DNA提取试剂盒进行相关操作。

e. Buffer PP和Buffer GW没有添加无水乙醇。
建议:确认Buffer PP和Buffer GW已经正确添加相应体积的无水乙醇。

(2)提取获得的基因组DNA产量低
可能存在的原因如下:

a. 组织样本保存不当或保存时间太长,导致基因组DNA已经降解。
建议:组织样本保存于液氮或者-70℃;尽量使用新近采集样本进行基因组DNA的提取。

b. 组织样本用量过少提取到的的基因组DNA含量会较少。
建议:有些植物样本含水量丰富,比如藻类等,可适当增加用量或将其失水后再进行操作

c. 样本液氮研磨不彻底或者研磨完成后在室温放置时间过长。
建议:液氮研磨要充分,尽量破碎样本细胞壁;研磨完成后请尽将样本加入Buffer PL中。

d. 洗脱液添加不正确
建议:请使用在65℃预热的Buffer EB进行洗脱;如果使用dd水或其他洗脱液,确认洗脱液的pH值在7.0-8.5之间。

e. 洗脱液体积太少。
建议:请按说明书上要求的用量滴加洗脱液,最少不低于50ul。

3. 为什么提取所获得得基因组DNA纯度低?

基因组DNA纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想,如无法酶切,PCR得不到目的基因片段等.

可能存在的原因如下:

a. 上清液过柱的时候存在沉淀,造成杂蛋白污染、RNA污染。
建议:尽量保证吸取的上清液中无沉淀,必要的话可多舍弃些上清液。

b. 省略了Buffer GW洗涤纯化柱,导致残留的离子污染。
建议:务必按说明书使用Buffer GW漂洗纯化柱,必要的话可以多漂洗一次,以尽量去除残留的离子。

c. Buffer GW漂洗纯化柱后,没有进行空管离心操作造成乙醇残留。
建议:按说明书进行正确的空管离心操作。

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